Si le requérant possède déjà les cellules somatiques à reprogrammer dans son laboratoire, celles-ci peuvent être envoyées congelées sur glace sèche ou vivantes dans un flacon de 25cm2. Il est fortement suggéré d’avoir un minimum de 500 000 cellules par cryovial. De plus, les cellules doivent avoir un faible nombre de passages et être capable de proliférer, car les cultures sénescentes ne sont pas facilement reprogrammables (excepté les PBMCs). Aucun cryovial de cellules ne sera conservé au sein de notre laboratoire. Les cellules non utilisées seront retournées au requérant en même temps que les clones d’iPSCs.
Ce service s’étend sur environ trois mois et inclut :
- Amplification des cellules somatiques
- Prise d’un échantillon de cellules pour le génotype parental
- Ensemencement pour la transduction et congélation du reste de cellules
- Test de mycoplasmes avant infection
- Transduction avec le virus du Sendai
- Ensemencement sur une couche de cellules nourricières (3 densités différentes)
- Observation et changement de milieu chaque jour
- Sélection d’environ 15 clones par lignée directement sur Matrigel
- Culture des iPSC sur Matrigel et mTSeR plus sans antibiotiques
- Amplification des 5 plus beaux clones au niveau morphologique
- Congélation de 5 cryovials par clone (Passages 3 et 4)