Microscopie par réflexion totale interne à fluorescence : Nikon H-TRIF

Nom d’usage : 

TIRF 

Application principale : 

Acquisition des phénomènes à l’interface cellule-lamelle, excitation limitée à un domaine de ~100 nm en z. 

Spécifications 

Statif du microscope: 

  • Microscope inversé Nikon Ti-E 

Module TIRF: 

  • Nikon H-TIRF 

Caméras : 

  • Hamamatsu Orca ER-C4742-0812AG CCD; 1344 (H) x 1024 (V); 6.45 µm/pixel 
  • Andor Xion DU-897E EMCCD;  512 x 512; 16 µm/pixel 

Source lumineuse pour acquisition en fluorescence : 

  • Acquisition TIRF: diodes laser Nikon LUN-4 : 405 nm, 488 nm, 561 nm, 640 nm; 
  • Épifluorescence : DEL Lumencor Sola SE (UV à 365 nm). 

Filtres pour fluorescence : 

  • DAPI :  Chroma 49028-ET;     Ex 395/25 nm, Em 460/50nm, DM 425nm. 
  • GFP : Chroma TRF49904-ET;     Ex 488/10 nm, Em 525/50nm, DM 500 nm LP.  
  • RFP : Chroma TRF49909-ET;     Ex 561/10 nm; Em 600/50 nm; DM 575 nm LP.  
  • GFP-RFP : Chroma TRF59904-ET:     Dual Ex 488/10 nm & 561/10 nm; Dual EM 525/50nm & 600/50 nm. 
  • CY5 : Chroma 41008:     Ex 620/60 nm; Em 700/75 nm; DM 660 nm LP 

Objectifs et calibrations :

Objectifs Calibration Andor Xion
µm/pixel @ bin 1x1 µm/pixel @ bin 1×1
Nikon Plan Fluor 4x 0.13 NA 1,613 4,000
Nikon Plan Apo 10x 0.45 NA DIC N2 0,641 1,600
Nikon Plan Fluor ELWD 20x 0.45 NA Ph1 0,322 0,800
Nikon Plan Apo VC 20x 0.75 NA DIC N2 0,322 0,800
Nikon Plan Apo Lambda 40x 0,95 NA DIC N2 0,161 0,400
Nikon Apo TIRF 60x 1.49 NA oil TIRF 0,108 0,267
Nikon Plan Apo VC 60x 1.30 NA water 0,108 0,267
Nikon Plan Apo 100x 1.40 NA oil DIC N2 0,065 0,160

Autres objectifs Nikon disponibles sur demande.

Autres composantes : 

  • Perfect Focus System (PFS : maintien du focus automatisé). 
  • Photostimulateur Mightex Polygon 400. 
  • Piezo-Z MCL 100 µm. 
  • Module d’analyse 3D Tracking and Measurement sur NIS Elements.