Le kit d’amplification GlobalFiler™ est un test multiplex qui identifie un ensemble de 24 marqueurs (STR) permettant l’identification des lignées cellulaires humaines à partir de l’ADN génomique. Les STRs sont de courtes séquences d’ADN répétées. Le nombre de répétions varie beaucoup selon l’individu et selon l’allèle. Cette technique doit être utilisée exclusivement dans le cadre de projet de recherche. 

Voici des exemples d’utilisation :

  • Comparer 2 lignées cellulaires
    • Lignée A VS lignée B
  • Identifier une lignée cellulaire (pour une publication)
  • Comparer une lignée maison
    • Lignée immortalisée VS l’ADN original du donneur
  • Vérifier la pureté d’une lignée
    • Contamination si présence de plus de 2 allèles

Technique 

L’identification se fait en utilisant le kit d’amplification PCR Globalfiler à partir d’ADN génomique. 

Le kit PCR comprend l’ensemble des amorces spécifiques pour chaque marqueur. Le PCR résultant sera ensuite migré par électrophorèse capillaire sur l’appareil DNA Analyzer 3730 XL (Applied Biosystem™). Nous utilisons les modules d’analyse décrit dans le kit d’utilisateur Globalfiler. 

Le kit comprend un contrôle d’échelle allélique permettant le génotypage automatique de la plupart des allèles pour les locus du kit et un contrôle d’ADN positif permettant la validation de l’expérience. 

Les données brutes sont analysées par GeneMapper. 

Deux fichiers Excel vous serons transmis par courriel : 

  • Le rapport des résultats 
    • Regroupe tous les résultats des 24 marqueurs pour chaque échantillon ainsi que les échantillons contrôles. 
  • Fichier de comparaison 
    • Permet d’évaluer facilement les échantillons/lignées entre eux en obtenant un pourcentage d’homologie. 

Nos délais de traitement et d’analyse sont d’environ 1-2 semaines.

Préparation des échantillons 

Nous traitons seulement de l’ADN génomique pur et de bonne qualité. 

  • Volume : 10-20 ul
  • Concentration : 25-50 ng/ul

Ceux-ci doivent être envoyés dans des microtubes 1.5 ml (Style Eppendorf), strips ou plaque 96 puits étanches. 

Règles d’envoi 

Communiquez avec nous pour nous faire part de votre demande de service d’identification de lignée cellulaire. Nous vous enverrons plus de détails sur la procédure à suivre pour la mise en place de votre projet.