La PCR digitale est une approche de grande précision, permettant la détection et la quantification des acides nucléiques de manière sensible et reproductible. Les mesures sont effectuées en divisant l’échantillon en fractions de sorte qu’il y ait soit aucune, soit une seule, soit plusieurs molécules cibles présentes dans toute réaction individuelle. Chaque fraction est analysée après un cycle de PCR en point final (End point) afin de déterminer la présence (réaction positive) ou l’absence (réaction négative) d’un signal de fluorescence. Le nombre absolu de molécules présentes dans l’échantillon est ensuite calculé.
Les avantage de la dPCR vs la qPCR
La quantification de la cible de l’échantillon par dPCR ne nécessite pas de courbe d’étalonnage, ce qui réduit les erreurs et améliore la précision.
La PCR digitale affiche une grande tolérance aux inhibiteurs de PCR, elle est ainsi moins perturbée par les variations d’efficacité de la PCR imputables au fractionnement d’échantillon et au cycle en point final.
Le service est complet : conception d’amorces spécifiques et dPCR
Le service de quantification absolue par PCR digital (dPCR) (QIAcuity One, Qiagen) offre des analyses utilisant les technologies EVAGreen, TaqMan ou multiplexing :
- Quantifications absolues en nombre de copies
- Génotypage de souris
- Détection de pathogènes microbien ou viral
- CNV (Copy Number Variation)
- Détection de mutation rare
- Titrage de virus AAV