Présentation

La plateforme de production de cellules souches du CRCHU de Québec se spécialise dans l’isolation et la reprogrammation de cellules somatiques en iPSC à partir de différentes sources (peau, sang, urine, etc.). Elle offre aussi la possibilité d’une formation pour l’utilisation de ces cellules. Avec plus d’une centaine de reprogrammation à son actif, la plateforme iPSC est en mesure de fournir un service de haute qualité et ce, à prix avantageux à l’ensemble des chercheurs académiques du pays.

En Bref

• En fonction depuis 2015
• Plus de 100 lignées d’iPSC produites
• Grande expertise dans l’isolation de cellules à partir de l’urine, de biopsies cutanées et de sang.
• Une première au Québec

Module 1

Module 1 : Reprogrammation de cellules somatiques avec le virus de Sendai

Si le requérant possède déjà les cellules somatiques à être reprogrammées dans son laboratoire, celles-ci peuvent être envoyées congelées sur glace sèche ou vivantes dans un flacon de 25cm2. Il est fortement suggéré d’avoir un minimum de 500 000 cellules par cryovial. De plus, les cellules doivent avoir un faible nombre de passages et être capable de proliférer, car les cultures sénescentes ne sont pas facilement reprogrammables (excepté les PBMCs). Aucun cryovial de cellules ne sera conservé au sein de notre laboratoire. Les cellules non utilisées seront retournées au requérant en même temps que les clones d’hiPSCs.

Ce service s’étend sur environ 3 mois et inclut :

• Amplification des cellules somatiques
• Prise d’un échantillon de cellules pour le génotype parental
• Ensemencement pour la transduction et congélation du reste de cellules
• Test de mycoplasmes avant infection par PCR
• Transduction avec le virus du Sendai
• Ensemencement sur une couche de cellules nourricières (3 densités différentes)
• Observation et changement de milieu à chaque jour
• Sélection d’environ 15 clones par lignée directement sur Matrigel
• Culture des iPSC sur Matrigel et mTSeR plus sans antibiotiques
• Amplification des 3 plus beaux clones au niveau morphologique
• Congélation de 5 cryovials par clone (Passages 3 et 4)

Module 2

Module 2a : Caractérisation complète d’un clone iPSC.

Les résultats obtenus lors de la caractérisation seront envoyés par courriel sous forme de rapport.

Module 2a: IF, FACS, formation EB, RT-PCR, hPSC Scorecard Panel

Ce service s’étend sur environ 1 mois et inclut:

• Immunofluorescence pour les marqueurs de pluripotence : OCT4, NANOG, SSEA4 et TRA-1-81
• Cytométrie de flux pour les marqueurs de surfaces TRA-1-60 et TRA-1-81
• Extraction d’ARN, rétro-transcription et PCR classique pour les marqueurs de pluripotence suivants : OCT4 endogène, NANOG, REX1, DNMT3B, hTERT
• Formation de corps embryoides spontanés (7 jours de différentiation), extraction d’ARN, rétro-transcription analyse avec le hPSC Scorecard Panel de ThermoFisher.
• Extraction d’ARN, rétro-transcription et PCR classique pour les marqueurs vérifiant la présence des transgènes et du génome SeV.

Module 2b : Caryotype moléculaire avec Cytoscan HD

Ce service s’étend sur environ 1 mois et inclut :

• Extraction de l’ADN génomique des iPSCs
• Envoi de l’ADN au laboratoire Génome Québec, Montréal
• Analyse des résultats

Module 2c : Génotype avec GenePrint 10

Ce service s’étend sur environ 1 mois et inclut :

• Extraction d’ADN pour la lignée parentale
• Envoi de l’ADN au laboratoire Génome Québec, Montréal
• Polymorphismes à répétitions en tandem court (STR) pour 9 loci et Amelogenine

Module 3 : Isolation de cellules somatiques à partir d’un prélèvement (OPTIONNEL)

Module 3a : Isolation de cellules à partir d’un prélèvement d’urine

Ce service permet d’obtenir une culture primaire de cellules d’urine et d’obtenir un minimum de 500 000 cellules environ en 1 mois. Le requérant doit s’engager à adopter nos protocoles de prélèvement et de transport pour l’échantillon d’urine. Celui-ci doit être envoyé à la plateforme dans un délai maximal de 4 heures, conservées à 4°C, pour que les cellules soient viables.

Cependant, nous avons mis au point un protocole permettant la survie et l’isolation possible des cellules d’urine dans un délai de 24 heures suivant le prélèvement.

Par contre, il est possible qu’un échantillon d’urine ne produise pas de colonies de cellules. Si tel est le cas, un autre prélèvement sera nécessaire.

Veuillez nous contacter pour plus d’information.

Module 3b : Isolation de fibroblastes à partir d’une biopsie de peau

Ce service permet d’établie une culture primaire de fibroblastes à partir d’une biopsie cutanée (5 à 10 mm) et d’obtenir environ 2 à 3 millions de cellules en 1 mois.

Seulement les biopsies cutanées fraîches seront acceptées. Le requérant doit s’engager à adopter nos protocoles de prélèvements et de transport pour la biopsie. Selon notre expérience, les étapes de prélèvement et de transport sont cruciales qui, mal réalisées, pourraient être à l’origine d’une incapacité à isoler des fibroblastes.

Module 3c : Isolation de cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC)

Ce service permet d’obtenir en moyenne 1 million de PBMC par ml de sang en moins de 2 heures. Le prélèvement doit se faire dans un tube d’héparine de sodium et doit être traité dans un délai de 48 heures.

 

Prix

Une réduction considérable allant jusqu’à 50% de réduction sur les coûts de reprogrammation cellulaire a été appliquée pour tous les chercheurs de la province de Québec.

Cette réduction est possible grâce à un récent octroi obtenu du Ministère de l’économie et de l’innovation du Québec, et ce, jusqu’en 2023.

 

Modules	Description	Prix chercheurs du Québec*	Prix
Module 1	Reprogrammation de cellules somatiques avec virus de Sendai	$3 155	$6 310
Module 2	Caractérisation complète d’un clone iPSC	$1 845	$2 845
Module 2a	IF, FACS, formation EB, RT-PCR, hPSC Scorecard Panel	$1 000	$2 000
Module 2b	Caryotype avec Cytoscan HD (Génome Québec)	$640	$640
Module 2c	Génotype avec GenePrint 10 (Génome Québec)	$205	$205
	Total (Modules 1 et 2)	$5 000	$9 155
Module 3	Optionnel
Module 3a	Isolation de cellules à partir d’un prélèvement d’urine	$500	$500
Module 3b	Isolation de fibroblastes à partir d’une biopsie de peau	$400	$400
Module 3c	Isolation de PBMC à partir d’un échantillon de sang	$300	$300

Formation

La plateforme de production de cellules du CRCHU de Québec offre une formation personnalisée sur la culture de routine des iPSCs.

La formation comporte une partie théorique et une formation pratique au LOEX. Tout le matériel nécessaire pour la formation est fourni.

Le prix varie en fonction des besoins de la personne formée.

N’hésitez pas à nous contacter pour plus de détails.

Contact

Directeur
François Gros-Louis, Ph. D.

Responsable
Laurie Martineau, M. Sc.

Production de cellules souches du CRCHU de Québec
Hôpital Enfant-Jésus
CMDGT/LOEX, Aile R
1401 18e Rue
Québec, Québec
G1J 1Z4
Canada

Téléphone
1-418-525-4444 extension 61707